依克那肽（Exenatide）是一個(gè)包含39個(gè)氨基酸殘基的肽（分子量為4186.6 Da），已被批準(zhǔn)用于治療1型和2型糖尿病。該肽可以增強(qiáng)胰腺細(xì)胞的葡萄糖依賴(lài)性胰島素的分泌，從而調(diào)控葡萄糖的代謝。在過(guò)去的幾年里，血漿中依克那肽的定量分析通常是用配體-結(jié)合法來(lái)完成的。例如，藥物動(dòng)力學(xué)研究中，常用酶免疫分析法定量依克那肽，但當(dāng)基質(zhì)中含有與待測(cè)物具有類(lèi)似物理化學(xué)性質(zhì)的干擾物時(shí)，該方法有時(shí)存在選擇性不夠的問(wèn)題。QTRAP 5500 質(zhì)譜系統(tǒng)MRM³定量技術(shù)可保證人血漿中依克那肽測(cè)定的高選擇性。

實(shí)驗(yàn)方法：

樣品配置：依克那肽從血漿中提出，提取液用氮?dú)鈸]干，復(fù)溶。在所有的制備步驟中，溶液的pH值和有機(jī)相濃度須精準(zhǔn)控制。

液相色譜：Shimadzu UFLC LC-20ACXR；反相色譜柱C-18 2.0×30 mm, 5μm；流速 0.6 ml/min；流動(dòng)相A 為0.1% 甲酸水溶液；流動(dòng)相B為0.1% 甲酸甲醇溶液；梯度洗脫，5min內(nèi)，流動(dòng)相B從2%增至95%；進(jìn)樣量5μl。

質(zhì)譜：使用AB SCIEX QTRAP 5500質(zhì)譜系統(tǒng)，MRM³掃描方式。在MRM³掃描中，離子阱填充時(shí)間設(shè)定為動(dòng)態(tài)填充時(shí)間（DFT），掃描速度10000Da/Sec，離子阱激發(fā)時(shí)間為25ms,每個(gè)質(zhì)譜掃描循環(huán)時(shí)長(zhǎng)0.17s。MRM3掃描的三級(jí)離子為838-396-202。

方法建立：

在增強(qiáng)一級(jí)質(zhì)譜全掃描（EMS）模式下，依克那肽產(chǎn)生帶5個(gè)正電荷的離子，m/z838.3，該離子被選作母離子。該離子在增強(qiáng)子離子（EPI）掃描模式下碎裂，產(chǎn)生的主要子離子為m/z396.4。該一級(jí)子離子在線性離子阱中發(fā)生碎裂，產(chǎn)生MS3譜圖，其主要子離子為m/z202.2,上述三個(gè)離子被用來(lái)構(gòu)建LC-MS MRM³定量方法。

結(jié)果與討論：

使用LC-MS MRM³分析血漿提取物中的依克那肽可以明顯地提高選擇性。通過(guò)給出的MRM³分析和傳統(tǒng)MRM分析所獲得色譜圖的比較，可以看出，MRM³色譜圖中基線較低，且沒(méi)有MRM色譜圖中的干擾峰。QTRAP 5500的掃描速度（10000Da/Sec）保證了有足夠的數(shù)據(jù)來(lái)獲得離子色譜峰，從而使得定量具有良好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度。